必須在使用前對傳感器進行校準,這是對發(fā)酵罐進行滅菌的較后一步操作。傳感器的校準在發(fā)酵罐外進行,將PH電極浸沒到含一種或多種標準緩沖液的適當容器中進行校準。這些操作較好均在發(fā)酵罐運行溫度下進行。PH電極需與發(fā)酵過程中使用的PH計相連接,PH計的校準裝置可按常規(guī)的PH計校準步驟來調(diào)整。由于發(fā)酵過程中重新校準的時分困難或者不可能,較好能固定PH計的校準控制,以避免實驗中的偶發(fā)性偏移,許多商業(yè)性的儀表都提供一些固定螺絲。
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校準以后,應該將傳感器插入到發(fā)酵罐中并進行密封。在發(fā)酵罐滅菌時,一般將PH計的連接物移開(采用高壓滅菌鍋滅菌時),滅菌后重新連接,PH傳感器開始工作。也有實驗操作人員用酒精對PH傳感器單獨消毒(即不放入滅菌鍋),主要是為了延長傳感器的使用壽命。然后需將傳感器立即插入且密封在罐內(nèi)。
必須指出,這一過程可能染菌。盡管有些報道稱在研究中規(guī)則地使用這一步驟沒有問題。具體方法如下:放好傳感器,加上一個合適的配件以使PH探頭易于由發(fā)酵罐頂盤進行安裝,然后將其在*中至少放置lh。探頭和配件必須是很干凈的,探頭的浸沒位置應高于配件。較后應迅速地將傳感器轉移到預先滅好菌的發(fā)酵罐中,其已與空氣供應系統(tǒng)相連,而且其中的空氣已開始流動。
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在滅菌或使用過程中,很可能會使校準發(fā)生偏移。對于狀況良好的傳感器,這種偏移不會超過0.2個單位。但一些研究人員仍建議在發(fā)酵罐滅菌以后進行校準或者再校準。目前已有適用于較大發(fā)酵罐的這種系統(tǒng),可以*無菌地取出傳感器,再將其部分地插入校準緩沖液中進行校準。
在實驗室規(guī)模下,有必要將傳感器*移出,利用前述的化學處理方法來進行再消毒。在實驗室中檢查一個可疑校準的較好方法是對發(fā)酵液進行無菌取樣,在發(fā)酵罐外測量其PH值盡快進行檢測、讀數(shù)。因為細胞在不斷變化的條件下(例如在連續(xù)培養(yǎng)中氧和基質(zhì)的消耗)進行連續(xù)代謝,如果培養(yǎng)基的緩沖性能較差,PH在幾分鐘內(nèi)即可發(fā)生顯著變化,從而無法正確檢查傳感器的校準。